一、基礎信息
試劑盒有 96T 和 48T 兩種規(guī)格，保質(zhì)期 6 個月（以包裝標簽為準）。用于體外定量測血清、血漿等生物液體中 IL - 6 濃度，僅適用于科研，不可用于臨床診斷。
其靈敏度達 0.1pg/mL，對 IL - 6 特異性強，與類似物幾乎無交叉反應。重復性佳，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 10%，檢測范圍在 1.5pg/mL - 48pg/mL。
二、檢測原理
采用雙抗體夾心法，就像精心策劃的 “分子抓捕游戲”。先在酶標板上布置抗 IL - 6 抗體 “陷阱”，實驗時 IL - 6 會主動 “落網(wǎng)” 與抗體結(jié)合，再加入辣根過氧化物酶標記抗體，形成穩(wěn)固 “組合”。洗板除去游離成分后，加顯色底物 TMB，在辣根過氧化物酶催化下，TMB 先變藍，加終止液后變黃，顏色越深，IL - 6 越多。最后用酶標儀在 450nm 波長測吸光度（OD 值）算濃度。
三、實驗必備物品
1、450nm 酶標儀，負責精準讀取數(shù)據(jù)。
2、不同量程加樣器及槍頭（0.5 - 10uL、2 - 20uL、20 - 200uL、200 - 1000uL），助力精確加樣。
3、37℃恒溫箱，提供穩(wěn)定實驗環(huán)境。
4、蒸餾水或去離子水。
四、檢測前準備
1、提前 1 小時從冰箱取出試劑盒和樣本，室溫平衡。
2、濃縮洗滌液若有結(jié)晶，室溫溶解后，20ml 濃縮液加蒸餾水或去離子水配成 400ml 洗滌液，余液放回 4℃。20× 洗滌緩沖液按 1：20 用蒸餾水稀釋。
五、樣品收集方法
血清：全血室溫放 2 小時或 4℃過夜，2000prm 離心 20 分鐘，取上清，用無內(nèi)毒素試管。
血漿：用 EDTA 鈉鹽抗凝，采集后 30 分鐘內(nèi)，2000prm 離心 15 分鐘，取上清，避開溶血、高血脂樣本。
組織勻漿：PBS（0.01M，pH = 7.4）洗組織，稱重剪碎，按 1：9 加 PBS（可加蛋白酶抑制劑），冰上研磨，可超聲破碎或反復凍融，5000prm 離心 5 - 10 分鐘，取上清。
細胞提取液：貼壁細胞冷 PBS 洗、胰蛋白酶消化，2000prm 離心 5 分鐘收集；懸浮細胞直接離心收集。細胞冷 PBS 洗 3 次，每 1×10?個細胞加 150 - 200μL PBS 重懸，反復凍融破碎，2000prm 離心 10 分鐘，取上清。
細胞培養(yǎng)上清等：2000prm 離心 20 分鐘，取上清。
六、樣品注意事項
1、1周內(nèi)檢測存 4℃，否則按用量分裝， - 20℃以下凍存，避免反復凍融，溶血樣本勿用。
樣品濃度高于標準品最高值需稀釋，先做預實驗定倍數(shù)。
2、化學裂解液制備樣本可能致測值偏差，部分重組蛋白可能與抗體不匹配無法檢測。
七、操作步驟
1. 算好預包被板條數(shù)，取出所需放 96 孔框架，余板密封存 4℃。
2. 試劑盒和樣本室溫（25 - 28oC）平衡 60min。
3. 設置標準品、樣本、空白孔。
4. 標準品孔加不同濃度標準品 50μL，樣本孔加待測樣本 50μL（可稀釋），空白孔加樣本稀釋液 50μL。
5. 各孔加辣根過氧化物酶標記檢測抗體 100μL，封板膜封孔，37℃溫育 45min。
6. 棄液拍干，每孔加 350μL 洗滌液，靜置 20s，甩去拍干，重復 5 次（可用洗板機）。
7. 每孔加底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
8. 每孔加終止液 50μL，15min 內(nèi) 450nm 測 OD 值。
八、結(jié)果計算
標準品和樣本設復孔取平均值。以標準品濃度為縱坐標，OD 值為橫坐標畫標準曲線（R2 越近 1 越好）。通過樣品吸光度和標準曲線算濃度（可用軟件），稀釋過的樣品濃度需乘稀釋倍數(shù)。
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