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偽狂犬病病毒探針法qPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，會(huì)引起偽狂犬病，病豬的臨床癥狀和病程隨年齡不同而有很大差異：哺乳仔豬為敏感，15日齡以內(nèi)的仔豬常表現(xiàn)為急性型，主要表現(xiàn)為體溫升高、拉稀、發(fā)抖、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、流涎、頸部肌肉僵硬、四肢劃水樣運(yùn)動(dòng)，昏迷死亡；育肥豬則大多數(shù)伴有體溫升高，呼吸困難，一般不發(fā)生死亡，耐過后呈長(zhǎng)朗隱性感染帶毒或排毒；成年豬常不呈現(xiàn)可見臨床癥狀或僅表現(xiàn)為輕微體溫升高，一般不發(fā)生死亡。母豬妊娠初期，可在感染后的20天左右發(fā)生流產(chǎn)，在妊娠后期，經(jīng)常發(fā)生死胎和木乃伊，或者產(chǎn)出弱胎和死胎。在完成豬瘟凈化的地區(qū)，偽狂犬病被認(rèn)為是對(duì)經(jīng)濟(jì)影響大的豬病毒病，因此偽狂犬病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的偽狂犬病病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，會(huì)引起偽狂犬病，病豬的臨床癥狀和病程隨年齡不同而有很大差異：哺乳仔豬為敏感，15日齡以內(nèi)的仔豬常表現(xiàn)為急性型，主要表現(xiàn)為體溫升高、拉稀、發(fā)抖、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、流涎、頸部肌肉僵硬、四肢劃水樣運(yùn)動(dòng)，昏迷死亡；育肥豬則大多數(shù)伴有體溫升高，呼吸困難，一般不發(fā)生死亡，耐過后呈長(zhǎng)朗隱性感染帶毒或排毒；成年豬常不呈現(xiàn)可見臨床癥狀或僅表現(xiàn)為輕微體溫升高，一般不發(fā)生死亡。母豬妊娠初期，可在感染后的20天左右發(fā)生流產(chǎn)，在妊娠后期，經(jīng)常發(fā)生死胎和木乃伊，或者產(chǎn)出弱胎和死胎。在完成豬瘟凈化的地區(qū)，偽狂犬病被認(rèn)為是對(duì)經(jīng)濟(jì)影響大的豬病毒病，因此偽狂犬病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對(duì)該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的偽狂犬病病毒探針法熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)偽狂犬病病毒設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他病毒株DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色蓋 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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偽狂犬病病毒qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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偽狂犬病病毒qPCR陽(yáng)性對(duì)照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無(wú) |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針混合干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽(yáng)性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照必須無(wú)Ct或Ct大于或等于35。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于35，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測(cè)樣品，如果無(wú)Ct或Ct大于或等于35，則為陰性。如果Ct小于35則為陽(yáng)性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
