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戊型肝炎病毒探針法qRT-PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
戊型肝炎(Hepatitis E )是一種經(jīng)糞一口傳播的急性傳染病。HEV是單股正鏈RNA病毒，呈球形、直徑 27~34nm無囊膜，核衣殼呈二十面體立體對稱。戊型肝炎病毒(HEV)為無包膜的球狀顆粒，分為1~8共8個(gè)基因型，中國內(nèi)地流行株主要為1型(曾稱緬甸株)，其次為4型。目前尚不能對HEV進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，可實(shí)驗(yàn)室感染獼猴等多種猴類，HEV對外界環(huán)境抵抗力不強(qiáng)。戊型肝炎傳播途徑(主要經(jīng)糞-口途徑傳播)和臨床表現(xiàn)(隱性感染及急性肝炎，不致慢性肝炎等)與戊型肝炎相似。戊型肝炎在15~39歲的青年和成人高發(fā)。戊型肝炎亦為自限性疾病。HEV 對肝細(xì)胞亦無直接病變作用(CPE)。機(jī)體于病后可獲得一定的免疫力，但不夠穩(wěn)固。目前無戊型肝炎疫苗，預(yù)防戊型肝炎采用切斷糞-口傳播途徑為主的措施。本產(chǎn)品以探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測戊型肝炎病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
戊型肝炎(Hepatitis E )是一種經(jīng)糞一口傳播的急性傳染病。HEV是單股正鏈RNA病毒，呈球形、直徑 27~34nm無囊膜，核衣殼呈二十面體立體對稱。戊型肝炎病毒(HEV)為無包膜的球狀顆粒，分為1~8共8個(gè)基因型，中國內(nèi)地流行株主要為1型(曾稱緬甸株)，其次為4型。目前尚不能對HEV進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，可實(shí)驗(yàn)室感染獼猴等多種猴類，HEV對外界環(huán)境抵抗力不強(qiáng)。戊型肝炎傳播途徑(主要經(jīng)糞-口途徑傳播)和臨床表現(xiàn)(隱性感染及急性肝炎，不致慢性肝炎等)與戊型肝炎相似。戊型肝炎在15~39歲的青年和成人高發(fā)。戊型肝炎亦為自限性疾病。HEV 對肝細(xì)胞亦無直接病變作用(CPE)。機(jī)體于病后可獲得一定的免疫力，但不夠穩(wěn)固。目前無戊型肝炎疫苗，預(yù)防戊型肝炎采用切斷糞-口傳播途徑為主的措施。本產(chǎn)品以探針法熒光定量RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測戊型肝炎病毒的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到1000拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)戊型肝炎病毒RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5各數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法qRT-PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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探針法qRT-PCR緩沖液 |
500μL |
0.5mL藍(lán)蓋管 |
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探針法qRT-PCR酶混合液v2 |
50μL |
0.5mL紅蓋管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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戊型肝炎病毒qRT-PCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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戊型肝炎病毒qRT-PCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針混合干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。如果需要RNA陽性樣品，需要另外訂購。
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。如果需要RNA陽性樣品，需要另外訂購。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5μL 1E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容，也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qRT-PCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)RT-PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-PCR陰性對照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)RT-PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-PCR陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于RT-PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標(biāo)曲樣本)結(jié)果為陰性，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重新樣本制備，重新進(jìn)行PCR擴(kuò)增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。
2. 如果陰性對照和陽性對照均正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須沒有讀數(shù)，或者大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40。對待測樣品，如果其Ct沒有讀數(shù)、大于或等于40則均為陰性，如果小于40則為陽性。
自備試劑
樣品RNA
樣品RNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
